引言
欢迎使用张锋 cell 40 基因定点突变试剂盒。本试剂盒采用先进的 CRISPR-Cas9 技术，能够高效、准确地对目标基因进行定点突变。本说明书将指导您使用试剂盒进行定点突变实验，包括试剂盒组成、实验步骤和注意事项等。
试剂盒组成
Cas9 蛋白（50 μL）
sgRNA（50 μL）
同源重组模板（50 μL）
缓冲液（10 mL）
阳性对照质粒（100 ng）
阴性对照质粒（100 ng）
阳性对照引物（20 μM）
阴性对照引物（20 μM）
实验步骤
1. 细胞培养
将待编辑细胞接种于 6 孔板中，密度为 2 × 105 个细胞/孔。过夜培养后，细胞应达到 70-80% 的汇合度。
2. 转染
将 Cas9 蛋白、sgRNA 和同源重组模板稀释到缓冲液中。将稀释后的混合物添加到细胞中，孵育 24 小时。
3. 纯化单克隆细胞
转染 24 小时后，用含抗生素的培养基筛选转染阳性细胞。单克隆细胞可通过限释培养或流式分选获得。
4. 验证突变
提取单克隆细胞的 DNA，使用阳性对照引物和阴性对照引物进行 PCR 扩增。通过测序验证目标基因的定点突变。
独特特点和吸引力
高效率：本试剂盒采用高效的 CRISPR-Cas9 技术，能够以较高的效率对目标基因进行定点突变。
准确性：sgRNA 经过精心设计，能够特异性地识别目标基因，从而确保突变的准确性。
简单易用：本试剂盒操作简单，实验步骤清晰，无需复杂的技术操作。
注意事项
本试剂盒仅供研究使用，不得用于临床诊断或治疗。
使用 CRISPR-Cas9 技术进行基因编辑时，存在脱靶效应的风险。请小心选择 sgRNA，并进行适当的脱靶效应检测。
实验过程中请遵守实验室安全准则，穿着必要的个人防护装备。
如果您在使用本试剂盒时遇到任何问题，请随时联系我们的技术支持团队。
