iPSCs干细胞制备方法及细胞活力检测试剂盒

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iPSCs干细胞制备方法及细胞活力检测试剂盒

导言

随着再生医学的飞速发展,诱导多能干细胞iPSCs)因其在疾病建模、药物筛选和细胞治疗方面的广阔应用前景而备受关注。iPSCs是通过将体细胞重新编程获得的,具有与胚胎干细胞类似的多能性,但避免了胚胎伦理争议。本文将介绍iPSCs的制备方法以及用于评估细胞活力检测试剂盒,旨在为研究人员提供实用指南。

iPSCs的制备方法

1. 病毒载体介导的重编程

病毒载体介导的重编程是制备iPSCs最常用的方法,利用逆转录病毒或慢病毒将Oct4、Sox2、Klf4和c-Myc等重编程因子转导至体细胞中。这些因子可启动细胞重编程过程,使体细胞逐步恢复多能性。病毒载体介导的重编程效率较高,但存在基因组整合的风险。

2. 转座子介导的重编程

转座子介导的重编程利用转座子系统将重编程因子整合至体细胞基因组中,避免了病毒载体的基因组整合风险。该方法使用转座酶将重编程因子携带的转座子元件插入到体细胞基因组的特定位点,从而实现重编程。转座子介导的重编程效率相对较低,但更安全。

3. 化学小分子介导的重编程

化学小分子介导的重编程利用小分子化合物,如Valproic acid(VPA)和Forskolin,模拟重编程因子对细胞的影响,诱导体细胞重编程。该方法无须基因修饰,操作简便,但效率较低,且可能产生表观遗传异常。

细胞活力检测试剂盒

细胞活力检测试剂盒用于评估细胞的存活状况和代谢活性。常用的检测试剂盒类型包括:

1. MTT(3-(4,5-二甲基噻唑-2-基)-2,5-二苯基四氮唑溴化物)法

MTT法基于细胞线粒体中琥珀酸脱氢酶的活性。活细胞中的琥珀酸脱氢酶将MTT还原为蓝紫色甲臜,其吸光度可反映细胞的活力水平。MTT法操作简便,灵敏度高,但可能会受到培养基成分的影响。

2. CCK-8(细胞计数试剂-8)法

CCK-8法与MTT法类似,也基于细胞线粒体中琥珀酸脱氢酶的活性。CCK-8在活细胞中被还原为橙黄色甲臜,其吸光度可反映细胞的活力水平。CCK-8法操作简单,灵敏度高,不受培养基成分的影响。

3. 活力/死细胞双染色法

活力/死细胞双染色法利用荧光染料来区分活细胞和死细胞。活细胞通常用绿色荧光染料(例如Calcein AM)染色,而死细胞用红色荧光染料(例如Ethidium bromide)染色。通过荧光显微镜观察,可以直观地评估细胞的活力状态。

结语

iPSCs的制备和细胞活力评估对于再生医学研究至关重要。本文介绍的iPSCs制备方法和细胞活力检测试剂盒提供了多种选择,研究人员可根据具体需求选择合适的技术。随着技术的不断进步,iPSCs在疾病建模、药物筛选和细胞治疗等领域的应用前景将更加广阔。

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